การละลายและการทำอิมัลชัน β-Sitosterol ในอาหารเลี้ยงเชื้อรา

ความท้าทายในการนำ $\beta$-Sitosterol ซึ่งเป็นสารที่ชอบไขมัน (lipophilic) ไปผสมในอาหารเลี้ยงเชื้อราที่เป็นน้ำ ต้องอาศัยวิธีการสองขั้นตอนคือ การละลายและการทำอิมัลชัน

1. วิธีการละลาย (การเตรียมสารละลายสต็อก)

เนื่องจาก $\beta$-Sitosterol ไม่ละลายในน้ำ จึงต้องละลายในตัวทำละลายอินทรีย์ที่เหมาะสมเพื่อสร้างสารละลายสต็อกที่มีความเข้มข้นสูงก่อน

• ตัวทำละลายที่แนะนำ: เอทานอล (Ethanol Absolute) หรือ DMSO (Dimethyl Sulfoxide)
• ขั้นตอน: ละลาย $\beta$-Sitosterol ในปริมาณน้อยที่สุดของตัวทำละลายที่เลือก (เช่น เพื่อสร้างสารละลายสต็อก 10-50 มก./มล.)
• ข้อควรระวัง: โดยทั่วไปนิยมใช้เอทานอลในอาหารเลี้ยงเชื้อมากกว่า เนื่องจากมีแนวโน้มที่จะเป็นพิษต่อเชื้อราน้อยกว่า แต่ความเข้มข้นสุดท้ายของตัวทำละลายในอาหารเลี้ยงเชื้อไม่ควรเกิน 0.5% ถึง 1% (v/v) เพื่อหลีกเลี่ยงการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อรา

2. อิมัลซิไฟเออร์ราคาประหยัดที่แนะนำ

เพื่อให้ $\beta$-Sitosterol คงตัวอยู่ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เป็นน้ำได้ จำเป็นต้องใช้อิมัลซิไฟเออร์ที่มีประสิทธิภาพและไม่เป็นพิษ

• คำแนะนำ: Polysorbate 80 (Tween 80) (รหัสสินค้า: 176)
• เหตุผล: Polysorbate 80 เป็นสารลดแรงตึงผิวชนิดไม่มีประจุ (nonionic surfactant) ที่มีประสิทธิภาพสูงและมีค่า HLB สูง เหมาะสำหรับการทำอิมัลชันชนิดน้ำมันในน้ำ (O/W) เป็นอย่างยิ่ง เป็นที่ยอมรับและใช้กันอย่างแพร่หลายในอาหารเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์และเชื้อรา เนื่องจากมีราคาไม่แพงและโดยทั่วไปไม่เป็นพิษต่อเชื้อราที่ความเข้มข้นต่ำ มักใช้ในการละลายไขมันในงานเหล่านี้

3. ขั้นตอนการผสม

1. ผสมสารละลายสต็อก $\beta$-Sitosterol (ที่ละลายในเอทานอล/DMSO) เข้ากับ Polysorbate 80 ในปริมาณที่ต้องการ
2. ค่อยๆ หยดส่วนผสมนี้ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อหลักในขณะที่คนอย่างแรง (เช่น ใช้เครื่องกวนแม่เหล็กหรือเครื่องโซนิเคชัน) เพื่อให้แน่ใจว่าเกิดอิมัลชันที่ละเอียดและคงตัวก่อนการฆ่าเชื้อหรือการเพาะเชื้อ