การเตรียม Bifidobacterium Longum แบบแช่แข็งแห้งสำหรับการเพาะเชื้อในห้องปฏิบัติการ

การจัดการกับเชื้อจุลินทรีย์แบบแช่แข็งแห้ง เช่น Bifidobacterium Longum ต้องใช้เทคนิคปลอดเชื้ออย่างระมัดระวัง เพื่อให้แน่ใจว่าเชื้อยังมีชีวิตอยู่และป้องกันการปนเปื้อน โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการเพาะเลี้ยงในห้องปฏิบัติการ

นี่คือขั้นตอนทั่วไปที่คุณสามารถปฏิบัติตามเพื่อคืนสภาพและเพาะเลี้ยง Bifidobacterium Longum แบบแช่แข็งแห้งในห้องปฏิบัติการของโรงเรียน:

1. เตรียมพื้นที่ทำงานให้ปลอดเชื้อ: ทำความสะอาดพื้นที่ทำงานของคุณด้วยน้ำยาฆ่าเชื้อ เช่น แอลกอฮอล์ 70% ตรวจสอบให้แน่ใจว่ามีเปลวไฟจากตะเกียงบุนเซน (Bunsen burner) เพื่อสร้างพื้นที่ทำงานที่ปลอดเชื้อรอบๆ
2. เตรียม Rehydration Medium: เตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวปริมาณเล็กน้อย (เช่น Broth หรืออาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมสำหรับ Bifidobacterium) อาหารเลี้ยงเชื้อนี้ควรผ่านการฆ่าเชื้อแล้วและอยู่ในอุณหภูมิห้องหรืออุ่นเล็กน้อย (ไม่ร้อน)
3. เปิดหลอดบรรจุเชื้อ: ใช้เทคนิคปลอดเชื้อในการเปิดหลอดบรรจุ Bifidobacterium Longum แบบแช่แข็งแห้ง ระมัดระวังอย่าให้ผงฟุ้งกระจาย
4. คืนสภาพเชื้อ: ใช้ปิเปตต์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วดูด Rehydration Medium ปริมาณเล็กน้อย (ตามคำแนะนำของผู้ผลิต หากมี หรือประมาณ 0.5-1 มล.) ค่อยๆ หยดลงในหลอดบรรจุผงแช่แข็งแห้ง ปิดฝาหลอดและหมุนเบาๆ เพื่อให้ผงละลายจนหมด หลีกเลี่ยงการเขย่าแรงๆ ซึ่งอาจทำลายเซลล์ได้
5. พักเชื้อ: ปล่อยให้เชื้อที่คืนสภาพแล้วพักใน Rehydration Medium เป็นเวลาสั้นๆ (ประมาณ 15-30 นาที) ที่อุณหภูมิห้อง เพื่อให้เซลล์ฟื้นตัว
6. ย้ายไปยัง Growth Medium: ใช้ปิเปตต์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วย้ายเชื้อที่คืนสภาพแล้วไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวหรืออาหารเลี้ยงเชื้อแข็ง (Agar plate) ที่เตรียมไว้สำหรับการเจริญเติบโตของ Bifidobacterium Bifidobacterium ส่วนใหญ่เป็นแบคทีเรียที่ไม่ต้องการออกซิเจน (Anaerobic) หรือต้องการออกซิเจนน้อย (Microaerophilic) ดังนั้นอาจต้องใช้อุปกรณ์หรือสภาวะพิเศษในการเพาะเลี้ยง (เช่น ตู้อบแบบ Anaerobic หรือซองสร้างสภาวะ Anaerobic)
7. บ่มเพาะ: นำอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีเชื้อไปบ่มเพาะในอุณหภูมิและสภาวะที่เหมาะสมสำหรับ Bifidobacterium (โดยทั่วไปคือ 37°C ในสภาวะ Anaerobic หรือ Microaerophilic) ตรวจสอบการเจริญเติบโตหลังจาก 24-48 ชั่วโมง

ข้อควรจำที่สำคัญ:

• เทคนิคปลอดเชื้อ: การรักษาความปลอดเชื้อเป็นสิ่งสำคัญที่สุดในทุกขั้นตอนเพื่อป้องกันการปนเปื้อนจากจุลินทรีย์อื่นๆ
• อาหารเลี้ยงเชื้อ: ใช้อาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมสำหรับการเจริญเติบโตของ Bifidobacterium
• สภาวะการบ่มเพาะ: จัดหาสภาวะการบ่มเพาะที่เหมาะสม โดยเฉพาะเรื่องออกซิเจน