เพื่อทดสอบฤทธิ์และประสิทธิภาพการต่อต้านจุลินทรีย์

โปรโตคอลมาตรฐานสำหรับการทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพต่อเชื้อ Staphylococcus aureus:

วัสดุที่ต้องการ:
- เชื้อ Staphylococcus aureus สายพันธุ์ (เช่น ATCC 25923)
- น้ำซุปถั่วเหลืองทริปติกหรือน้ำซุปมูลเลอร์-ฮินตัน
- วุ้นมุลเลอร์-ฮินตัน
- สารต้านจุลชีพที่จะทดสอบ
- จานเพาะเชื้อปลอดเชื้อ
- ไม้พันสำลีหรือสเปรดเดอร์ที่ปราศจากเชื้อ
- ตู้ฟัก
- ห่วงจุลินทรีย์หรือเข็มปลูกเชื้อ

ขั้นตอน:

1. การเตรียมเชื้อ Staphylococcus aureus:
ก. ปลูกเชื้อ Staphylococcus aureus ลงในซุปถั่วเหลืองทริปติกหรือน้ำซุปมูลเลอร์-ฮินตัน
ข. ฟักวัฒนธรรมน้ำซุปที่อุณหภูมิ 35-37°C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมงเพื่อให้ได้วัฒนธรรมน้ำซุปที่สดใหม่และกำลังเติบโต

2. การกำหนดมาตรฐานหัวเชื้อ:
ก. ปรับความขุ่นของการเพาะน้ำซุปให้ตรงกับมาตรฐานความขุ่นของ McFarland 0.5 (ประมาณ 1-2 x 10^8 CFU/มล.)
ข. ซึ่งสามารถทำได้โดยการเจือจางวัฒนธรรมน้ำซุปด้วยน้ำเกลือหรือน้ำซุปที่ปราศจากเชื้อ

3. การเตรียมแผ่นวุ้น:
ก. เตรียมเพลตวุ้นมูลเลอร์-ฮินตันตามคำแนะนำของผู้ผลิต
ข. ปล่อยให้วุ้นแข็งตัวและแห้งก่อนใช้งาน

4. การเพาะเชื้อเพลตวุ้น:
ก. จุ่มสำลีหรือสเปรดเดอร์ฆ่าเชื้อลงในหัวเชื้อที่ได้มาตรฐาน แล้วเกลี่ยให้ทั่วบนจานเลี้ยงเชื้อเพื่อให้ได้สนามหญ้าที่มีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียสม่ำเสมอ
ข. ปล่อยให้หัวเชื้อแห้งสักครู่ก่อนดำเนินการต่อ

5. การใช้สารต้านจุลชีพ:
ก. ขึ้นอยู่กับประเภทของสารต้านจุลชีพ (เช่น จาน หลุม หรือแถบ) ปฏิบัติตามวิธีการที่เหมาะสมในการทาสารต้านจุลชีพบนเพลตวุ้นที่เพาะเชื้อ
ข. สำหรับวิธีการแพร่กระจายแบบจาน ให้วางแผ่นต้านจุลชีพลงบนพื้นผิววุ้นที่ได้รับการฉีดเชื้อโดยใช้คีมปลอดเชื้อ
ค. สำหรับวิธีการแพร่บ่อ ให้ตัดบ่อลงในวุ้นโดยใช้เครื่องเจาะไม้ก๊อกปลอดเชื้อหรือเครื่องมือที่คล้ายกัน แล้วปิเปตสารละลายต้านจุลชีพลงในบ่อ
ง. สำหรับแถบต้านจุลชีพ ให้วางแถบไว้บนพื้นผิววุ้นที่ได้รับการฉีดวัคซีนตามคำแนะนำของผู้ผลิต

6. การฟักตัว:
ก. ฟักเพลตวุ้นที่เพาะไว้ที่อุณหภูมิ 35-37°C เป็นเวลา 16-24 ชั่วโมง

7. การตีความ:
ก. หลังจากการฟักตัว ให้ตรวจสอบแผ่นเพื่อดูโซนการยับยั้งรอบๆ สารต้านจุลชีพ
ข. วัดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนการยับยั้งเป็นมิลลิเมตร (มม.) โดยใช้คาลิปเปอร์หรือไม้บรรทัด
ค. อ้างถึงแนวทางมาตรฐานหรือเกณฑ์การตีความ (เช่น CLSI หรือ EUCAST) เพื่อพิจารณาความอ่อนแอหรือการต้านทานของ Staphylococcus aureus ต่อสารต้านจุลชีพที่ทดสอบแล้ว