UV-VIS Anti-Trypsic (Anti-Trypsin) Activity Measurement

  • Product Code: 125877

การวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซิน UV-VIS

฿2,990.00

วัตถุประสงค์

เพื่อวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซินของสารสกัดหรือสารประกอบจากพืชโดยใช้สเปกโตรสโคปี UV-VIS โดยประเมินความสามารถในการยับยั้งกิจกรรมของทริปซินบนพื้นผิว (เช่น BAPNA หรือเคซีน)

วัสดุ

  • เอนไซม์ทริปซิน : ทริปซินจากวัว มักมาจากตับอ่อน (ผงแห้ง)
  • สารตั้งต้น : N-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide hydrochloride (BAPNA) หรือ casein
  • บัฟเฟอร์ : Tris-HCl (50 mM, pH 7.8) หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาไลน์ (PBS) (50 mM, pH 7.4)
  • สารสกัด/สารประกอบจากพืช : ตัวอย่างทดสอบที่มีฤทธิ์ต้านทริปซิน
  • ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) หรือตัวทำละลายที่เหมาะสมอื่น ๆ (หากจำเป็นในการละลายสารสกัดจากพืช)
  • เครื่องวัดค่าสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
  • คิวเวตต์ : ความยาวเส้นทาง 1 ซม.
  • อ่างน้ำ/ตู้ฟัก : ตั้งไว้ที่ 37°C
  • สารหยุดการหลั่ง : กรดอะซิติก หรือ กรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA, 10%)

วิธี

  1. การเตรียมสารละลาย

    • สารละลายสต็อกทริปซิน : ละลายทริปซินในบัฟเฟอร์ Tris-HCl จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมส่วนย่อยและเก็บที่อุณหภูมิ -20°C
    • สารละลายพื้นผิว BAPNA : ละลาย BAPNA (1 มิลลิโมลาร์) ในบัฟเฟอร์ Tris-HCl หรือไม่ก็ละลายเคซีน (1%) ใน PBS เพื่อทดสอบเคซีน
    • สารละลายสารสกัดจากพืช : ละลายสารสกัดจากพืชในตัวทำละลายที่เหมาะสม (เช่น DMSO) จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมสารละลายเจือจางต่างๆ สำหรับการกำหนด IC50
  2. ตัวอย่างควบคุมและทดสอบ

    • การควบคุมว่างเปล่า : ประกอบด้วยบัฟเฟอร์และสารตั้งต้นแต่ไม่มีทริปซินหรือสารสกัดจากพืช
    • การควบคุมเชิงบวก : ประกอบด้วยทริปซินและสารตั้งต้นที่ไม่มีสารสกัดจากพืชเพื่อวัดกิจกรรมเอนไซม์สูงสุด
    • ตัวอย่างการทดสอบ : ประกอบด้วยทริปซิน สารตั้งต้น และสารสกัดจากพืชในความเข้มข้นต่างๆ เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ยับยั้ง
  3. การฟักไข่

    • ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
      • การควบคุมแบบว่างเปล่า : บัฟเฟอร์ 900 µL + สารตั้งต้น 100 µL
      • การควบคุมเชิงบวก : บัฟเฟอร์ 800 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL
      • ตัวอย่างการทดสอบ : บัฟเฟอร์ 700 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL + สารละลายสารสกัดจากพืช 100 µL (เปลี่ยนความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชสำหรับการศึกษาการยับยั้ง)
    • ผสมเบาๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
  4. การยุติปฏิกิริยา

    • หลังจากระยะฟักตัว ให้เติมสารละลายหยุดการทำงาน (TCA 10%) 100 µL เพื่อยุติปฏิกิริยาในแต่ละคิวเวตต์ วิธีนี้จะทำให้โปรตีนตกตะกอนในการทดสอบเคซีน หรือหยุดการปล่อย p-nitroaniline จาก BAPNA
  5. การวัด UV-VIS

    • สำหรับการทดสอบ BAPNA ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สอดคล้องกับสีเหลืองของ p-nitroaniline) โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
    • สำหรับการทดสอบเคซีน ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร เพื่อตรวจจับปริมาณไทโรซีนหรือกรดอะมิโนอะโรมาติกอื่นๆ ที่ปล่อยออกมาจากการย่อยเคซีน
    • บันทึกค่าการดูดกลืนแสงสำหรับแต่ละตัวอย่าง

หมายเหตุ

  • ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวทำละลายที่ใช้สำหรับสารสกัดจากพืชไม่รบกวนการทำงานของเอนไซม์หรือการวัด UV-VIS
  • รักษาตัวอย่างทั้งหมดไว้ที่อุณหภูมิ 37°C ในระหว่างการฟักเพื่อให้เอนไซม์มีกิจกรรมเหมาะสมที่สุด
  • ทำซ้ำตัวอย่างแต่ละชุดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าจะได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้

ผลลัพธ์และการตีความ

  • การลดลงของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สำหรับ BAPNA) หรือ 280 นาโนเมตร (สำหรับเคซีน) เมื่อมีสารสกัดจากพืช บ่งชี้ถึงการยับยั้งทริปซิน
  • ความสามารถของสารสกัดจากพืชในการยับยั้งทริปซินสามารถวัดได้โดยการเปรียบเทียบกับตัวควบคุมเชิงบวก

ขั้นตอนการให้บริการ
ขั้นตอน ขั้นตอน ผลลัพธ์ที่คาดหวัง
1

Prepare the...

A 1 mg/mL plant extract solution ready for testing.

2

Prepare...

A clear Tris-HCl buffer at 20 mM and pH 7.5.

3

Dissolve...

A trypsin solution at the required concentration (60 µg in the chosen volume) in Tris-HCl buffer.

4

Prepare...

A 1 mM BApNA substrate solution in Tris-HCl buffer with 1% DMSO.

5

Prepare...

A 1 mg/mL AEBSF solution as a known inhibitor of trypsin.And negative control.

6

Pipette 40...

Each well contains 40 µL of trypsin.
7

Pipette 40...

Each well now contains 80 µL total volume: 40 µL trypsin + 40 µL sample/control.

8

Incubate the...

Pre-incubation for trypsin inhibition reaction to occur.

9

Add 100...

Substrate is introduced, final well volume is 180 µL.

10

Incubate the...

Enzymatic hydrolysis of BApNA occurs (or is inhibited), generating color.

11

Add 30%...

Reaction is halted by acidification; color development is stabilized.

12

Measure and...

Absorbance values (OD) for control and sample wells are obtained.

13

Calculate percentage...

Percentage inhibition result for each sample.

You will receive a report for the % Inhibition of Trypsin fields when we provide this service

UV-VIS Anti-Trypsic (Anti-Trypsin) Activity Measurement

การวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซิน UV-VIS

วัตถุประสงค์

เพื่อวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซินของสารสกัดหรือสารประกอบจากพืชโดยใช้สเปกโตรสโคปี UV-VIS โดยประเมินความสามารถในการยับยั้งกิจกรรมของทริปซินบนพื้นผิว (เช่น BAPNA หรือเคซีน)

วัสดุ

  • เอนไซม์ทริปซิน : ทริปซินจากวัว มักมาจากตับอ่อน (ผงแห้ง)
  • สารตั้งต้น : N-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide hydrochloride (BAPNA) หรือ casein
  • บัฟเฟอร์ : Tris-HCl (50 mM, pH 7.8) หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาไลน์ (PBS) (50 mM, pH 7.4)
  • สารสกัด/สารประกอบจากพืช : ตัวอย่างทดสอบที่มีฤทธิ์ต้านทริปซิน
  • ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) หรือตัวทำละลายที่เหมาะสมอื่น ๆ (หากจำเป็นในการละลายสารสกัดจากพืช)
  • เครื่องวัดค่าสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
  • คิวเวตต์ : ความยาวเส้นทาง 1 ซม.
  • อ่างน้ำ/ตู้ฟัก : ตั้งไว้ที่ 37°C
  • สารหยุดการหลั่ง : กรดอะซิติก หรือ กรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA, 10%)

วิธี

  1. การเตรียมสารละลาย

    • สารละลายสต็อกทริปซิน : ละลายทริปซินในบัฟเฟอร์ Tris-HCl จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมส่วนย่อยและเก็บที่อุณหภูมิ -20°C
    • สารละลายพื้นผิว BAPNA : ละลาย BAPNA (1 มิลลิโมลาร์) ในบัฟเฟอร์ Tris-HCl หรือไม่ก็ละลายเคซีน (1%) ใน PBS เพื่อทดสอบเคซีน
    • สารละลายสารสกัดจากพืช : ละลายสารสกัดจากพืชในตัวทำละลายที่เหมาะสม (เช่น DMSO) จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมสารละลายเจือจางต่างๆ สำหรับการกำหนด IC50
  2. ตัวอย่างควบคุมและทดสอบ

    • การควบคุมว่างเปล่า : ประกอบด้วยบัฟเฟอร์และสารตั้งต้นแต่ไม่มีทริปซินหรือสารสกัดจากพืช
    • การควบคุมเชิงบวก : ประกอบด้วยทริปซินและสารตั้งต้นที่ไม่มีสารสกัดจากพืชเพื่อวัดกิจกรรมเอนไซม์สูงสุด
    • ตัวอย่างการทดสอบ : ประกอบด้วยทริปซิน สารตั้งต้น และสารสกัดจากพืชในความเข้มข้นต่างๆ เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ยับยั้ง
  3. การฟักไข่

    • ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
      • การควบคุมแบบว่างเปล่า : บัฟเฟอร์ 900 µL + สารตั้งต้น 100 µL
      • การควบคุมเชิงบวก : บัฟเฟอร์ 800 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL
      • ตัวอย่างการทดสอบ : บัฟเฟอร์ 700 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL + สารละลายสารสกัดจากพืช 100 µL (เปลี่ยนความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชสำหรับการศึกษาการยับยั้ง)
    • ผสมเบาๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
  4. การยุติปฏิกิริยา

    • หลังจากระยะฟักตัว ให้เติมสารละลายหยุดการทำงาน (TCA 10%) 100 µL เพื่อยุติปฏิกิริยาในแต่ละคิวเวตต์ วิธีนี้จะทำให้โปรตีนตกตะกอนในการทดสอบเคซีน หรือหยุดการปล่อย p-nitroaniline จาก BAPNA
  5. การวัด UV-VIS

    • สำหรับการทดสอบ BAPNA ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สอดคล้องกับสีเหลืองของ p-nitroaniline) โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
    • สำหรับการทดสอบเคซีน ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร เพื่อตรวจจับปริมาณไทโรซีนหรือกรดอะมิโนอะโรมาติกอื่นๆ ที่ปล่อยออกมาจากการย่อยเคซีน
    • บันทึกค่าการดูดกลืนแสงสำหรับแต่ละตัวอย่าง

หมายเหตุ

  • ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวทำละลายที่ใช้สำหรับสารสกัดจากพืชไม่รบกวนการทำงานของเอนไซม์หรือการวัด UV-VIS
  • รักษาตัวอย่างทั้งหมดไว้ที่อุณหภูมิ 37°C ในระหว่างการฟักเพื่อให้เอนไซม์มีกิจกรรมเหมาะสมที่สุด
  • ทำซ้ำตัวอย่างแต่ละชุดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าจะได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้

ผลลัพธ์และการตีความ

  • การลดลงของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สำหรับ BAPNA) หรือ 280 นาโนเมตร (สำหรับเคซีน) เมื่อมีสารสกัดจากพืช บ่งชี้ถึงการยับยั้งทริปซิน
  • ความสามารถของสารสกัดจากพืชในการยับยั้งทริปซินสามารถวัดได้โดยการเปรียบเทียบกับตัวควบคุมเชิงบวก

Mechanism -
Appearance -
Longevity -
Strength -
Storage -
Shelf Life -
Allergen(s) -
Dosage (Range) -
Dosage (Per Day) -
Mix Method -
Heat Resistance -
Stable in pH range -
Solubility -
Product Types -
INCI -
Service Steps
Step Procedure Expected Result
1

Prepare the...

A 1 mg/mL plant extract solution ready for testing.

2

Prepare...

A clear Tris-HCl buffer at 20 mM and pH 7.5.

3

Dissolve...

A trypsin solution at the required concentration (60 µg in the chosen volume) in Tris-HCl buffer.

4

Prepare...

A 1 mM BApNA substrate solution in Tris-HCl buffer with 1% DMSO.

5

Prepare...

A 1 mg/mL AEBSF solution as a known inhibitor of trypsin.And negative control.

6

Pipette 40...

Each well contains 40 µL of trypsin.
7

Pipette 40...

Each well now contains 80 µL total volume: 40 µL trypsin + 40 µL sample/control.

8

Incubate the...

Pre-incubation for trypsin inhibition reaction to occur.

9

Add 100...

Substrate is introduced, final well volume is 180 µL.

10

Incubate the...

Enzymatic hydrolysis of BApNA occurs (or is inhibited), generating color.

11

Add 30%...

Reaction is halted by acidification; color development is stabilized.

12

Measure and...

Absorbance values (OD) for control and sample wells are obtained.

13

Calculate percentage...

Percentage inhibition result for each sample.

Purchase History for

Loading purchase history...

ตะกร้า

ไม่มีสินค้า

Subtotal: ฿0.00
฿0.00 รวมทั้งสิ้น :

ข้อมูลสต๊อคสินค้าเป็นข้อมูล real-time ณ เวลาปัจจุบัน หากมีการเปลี่ยนแปลง หลังจากท่านชำระเงิน จะเรียนแจ้งภายใน 30นาที
คุณสามารถดู/เลือกกำหนดการจัดส่งในหน้าถัดไป