UV-VIS Anti-Trypsic (Anti-Trypsin) Activity Measurement
- Product Code: 125877
การวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซิน UV-VIS
วัตถุประสงค์
เพื่อวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซินของสารสกัดหรือสารประกอบจากพืชโดยใช้สเปกโตรสโคปี UV-VIS โดยประเมินความสามารถในการยับยั้งกิจกรรมของทริปซินบนพื้นผิว (เช่น BAPNA หรือเคซีน)
วัสดุ
- เอนไซม์ทริปซิน : ทริปซินจากวัว มักมาจากตับอ่อน (ผงแห้ง)
- สารตั้งต้น : N-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide hydrochloride (BAPNA) หรือ casein
- บัฟเฟอร์ : Tris-HCl (50 mM, pH 7.8) หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาไลน์ (PBS) (50 mM, pH 7.4)
- สารสกัด/สารประกอบจากพืช : ตัวอย่างทดสอบที่มีฤทธิ์ต้านทริปซิน
- ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) หรือตัวทำละลายที่เหมาะสมอื่น ๆ (หากจำเป็นในการละลายสารสกัดจากพืช)
- เครื่องวัดค่าสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
- คิวเวตต์ : ความยาวเส้นทาง 1 ซม.
- อ่างน้ำ/ตู้ฟัก : ตั้งไว้ที่ 37°C
- สารหยุดการหลั่ง : กรดอะซิติก หรือ กรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA, 10%)
วิธี
-
การเตรียมสารละลาย
- สารละลายสต็อกทริปซิน : ละลายทริปซินในบัฟเฟอร์ Tris-HCl จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมส่วนย่อยและเก็บที่อุณหภูมิ -20°C
- สารละลายพื้นผิว BAPNA : ละลาย BAPNA (1 มิลลิโมลาร์) ในบัฟเฟอร์ Tris-HCl หรือไม่ก็ละลายเคซีน (1%) ใน PBS เพื่อทดสอบเคซีน
- สารละลายสารสกัดจากพืช : ละลายสารสกัดจากพืชในตัวทำละลายที่เหมาะสม (เช่น DMSO) จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมสารละลายเจือจางต่างๆ สำหรับการกำหนด IC50
-
ตัวอย่างควบคุมและทดสอบ
- การควบคุมว่างเปล่า : ประกอบด้วยบัฟเฟอร์และสารตั้งต้นแต่ไม่มีทริปซินหรือสารสกัดจากพืช
- การควบคุมเชิงบวก : ประกอบด้วยทริปซินและสารตั้งต้นที่ไม่มีสารสกัดจากพืชเพื่อวัดกิจกรรมเอนไซม์สูงสุด
- ตัวอย่างการทดสอบ : ประกอบด้วยทริปซิน สารตั้งต้น และสารสกัดจากพืชในความเข้มข้นต่างๆ เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ยับยั้ง
-
การฟักไข่
- ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
- การควบคุมแบบว่างเปล่า : บัฟเฟอร์ 900 µL + สารตั้งต้น 100 µL
- การควบคุมเชิงบวก : บัฟเฟอร์ 800 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL
- ตัวอย่างการทดสอบ : บัฟเฟอร์ 700 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL + สารละลายสารสกัดจากพืช 100 µL (เปลี่ยนความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชสำหรับการศึกษาการยับยั้ง)
- ผสมเบาๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
- ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
-
การยุติปฏิกิริยา
- หลังจากระยะฟักตัว ให้เติมสารละลายหยุดการทำงาน (TCA 10%) 100 µL เพื่อยุติปฏิกิริยาในแต่ละคิวเวตต์ วิธีนี้จะทำให้โปรตีนตกตะกอนในการทดสอบเคซีน หรือหยุดการปล่อย p-nitroaniline จาก BAPNA
-
การวัด UV-VIS
- สำหรับการทดสอบ BAPNA ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สอดคล้องกับสีเหลืองของ p-nitroaniline) โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
- สำหรับการทดสอบเคซีน ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร เพื่อตรวจจับปริมาณไทโรซีนหรือกรดอะมิโนอะโรมาติกอื่นๆ ที่ปล่อยออกมาจากการย่อยเคซีน
- บันทึกค่าการดูดกลืนแสงสำหรับแต่ละตัวอย่าง
หมายเหตุ
- ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวทำละลายที่ใช้สำหรับสารสกัดจากพืชไม่รบกวนการทำงานของเอนไซม์หรือการวัด UV-VIS
- รักษาตัวอย่างทั้งหมดไว้ที่อุณหภูมิ 37°C ในระหว่างการฟักเพื่อให้เอนไซม์มีกิจกรรมเหมาะสมที่สุด
- ทำซ้ำตัวอย่างแต่ละชุดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าจะได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้
ผลลัพธ์และการตีความ
- การลดลงของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สำหรับ BAPNA) หรือ 280 นาโนเมตร (สำหรับเคซีน) เมื่อมีสารสกัดจากพืช บ่งชี้ถึงการยับยั้งทริปซิน
- ความสามารถของสารสกัดจากพืชในการยับยั้งทริปซินสามารถวัดได้โดยการเปรียบเทียบกับตัวควบคุมเชิงบวก
ขั้นตอนการให้บริการ
| ขั้นตอน | ขั้นตอน | ผลลัพธ์ที่คาดหวัง |
|---|---|---|
| 1 | Prepare the... |
A 1 mg/mL plant extract solution ready for testing. |
| 2 | Prepare... |
A clear Tris-HCl buffer at 20 mM and pH 7.5. |
| 3 | Dissolve... |
A trypsin solution at the required concentration (60 µg in the chosen volume) in Tris-HCl buffer. |
| 4 | Prepare... |
A 1 mM BApNA substrate solution in Tris-HCl buffer with 1% DMSO. |
| 5 | Prepare... |
A 1 mg/mL AEBSF solution as a known inhibitor of trypsin.And negative control. |
| 6 | Pipette 40... |
Each well contains 40 µL of trypsin. |
| 7 | Pipette 40... |
Each well now contains 80 µL total volume: 40 µL trypsin + 40 µL sample/control. |
| 8 | Incubate the... |
Pre-incubation for trypsin inhibition reaction to occur. |
| 9 | Add 100... |
Substrate is introduced, final well volume is 180 µL. |
| 10 | Incubate the... |
Enzymatic hydrolysis of BApNA occurs (or is inhibited), generating color. |
| 11 | Add 30%... |
Reaction is halted by acidification; color development is stabilized. |
| 12 | Measure and... |
Absorbance values (OD) for control and sample wells are obtained. |
| 13 | Calculate percentage... |
Percentage inhibition result for each sample. |
You will receive a report for the % Inhibition of Trypsin fields when we provide this service
UV-VIS Anti-Trypsic (Anti-Trypsin) Activity Measurement
การวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซิน UV-VIS
วัตถุประสงค์
เพื่อวัดกิจกรรมต่อต้านทริปซินของสารสกัดหรือสารประกอบจากพืชโดยใช้สเปกโตรสโคปี UV-VIS โดยประเมินความสามารถในการยับยั้งกิจกรรมของทริปซินบนพื้นผิว (เช่น BAPNA หรือเคซีน)
วัสดุ
- เอนไซม์ทริปซิน : ทริปซินจากวัว มักมาจากตับอ่อน (ผงแห้ง)
- สารตั้งต้น : N-Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide hydrochloride (BAPNA) หรือ casein
- บัฟเฟอร์ : Tris-HCl (50 mM, pH 7.8) หรือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซาไลน์ (PBS) (50 mM, pH 7.4)
- สารสกัด/สารประกอบจากพืช : ตัวอย่างทดสอบที่มีฤทธิ์ต้านทริปซิน
- ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ (DMSO) หรือตัวทำละลายที่เหมาะสมอื่น ๆ (หากจำเป็นในการละลายสารสกัดจากพืช)
- เครื่องวัดค่าสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
- คิวเวตต์ : ความยาวเส้นทาง 1 ซม.
- อ่างน้ำ/ตู้ฟัก : ตั้งไว้ที่ 37°C
- สารหยุดการหลั่ง : กรดอะซิติก หรือ กรดไตรคลอโรอะซิติก (TCA, 10%)
วิธี
-
การเตรียมสารละลาย
- สารละลายสต็อกทริปซิน : ละลายทริปซินในบัฟเฟอร์ Tris-HCl จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมส่วนย่อยและเก็บที่อุณหภูมิ -20°C
- สารละลายพื้นผิว BAPNA : ละลาย BAPNA (1 มิลลิโมลาร์) ในบัฟเฟอร์ Tris-HCl หรือไม่ก็ละลายเคซีน (1%) ใน PBS เพื่อทดสอบเคซีน
- สารละลายสารสกัดจากพืช : ละลายสารสกัดจากพืชในตัวทำละลายที่เหมาะสม (เช่น DMSO) จนมีความเข้มข้นสุดท้าย 1 มก./มล. เตรียมสารละลายเจือจางต่างๆ สำหรับการกำหนด IC50
-
ตัวอย่างควบคุมและทดสอบ
- การควบคุมว่างเปล่า : ประกอบด้วยบัฟเฟอร์และสารตั้งต้นแต่ไม่มีทริปซินหรือสารสกัดจากพืช
- การควบคุมเชิงบวก : ประกอบด้วยทริปซินและสารตั้งต้นที่ไม่มีสารสกัดจากพืชเพื่อวัดกิจกรรมเอนไซม์สูงสุด
- ตัวอย่างการทดสอบ : ประกอบด้วยทริปซิน สารตั้งต้น และสารสกัดจากพืชในความเข้มข้นต่างๆ เพื่อตรวจสอบฤทธิ์ยับยั้ง
-
การฟักไข่
- ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
- การควบคุมแบบว่างเปล่า : บัฟเฟอร์ 900 µL + สารตั้งต้น 100 µL
- การควบคุมเชิงบวก : บัฟเฟอร์ 800 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL
- ตัวอย่างการทดสอบ : บัฟเฟอร์ 700 µL + สารตั้งต้น 100 µL + ทริปซิน 100 µL + สารละลายสารสกัดจากพืช 100 µL (เปลี่ยนความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชสำหรับการศึกษาการยับยั้ง)
- ผสมเบาๆ และฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 30 นาที
- ในแต่ละคิวเวตต์ ให้เติมส่วนประกอบต่อไปนี้:
-
การยุติปฏิกิริยา
- หลังจากระยะฟักตัว ให้เติมสารละลายหยุดการทำงาน (TCA 10%) 100 µL เพื่อยุติปฏิกิริยาในแต่ละคิวเวตต์ วิธีนี้จะทำให้โปรตีนตกตะกอนในการทดสอบเคซีน หรือหยุดการปล่อย p-nitroaniline จาก BAPNA
-
การวัด UV-VIS
- สำหรับการทดสอบ BAPNA ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สอดคล้องกับสีเหลืองของ p-nitroaniline) โดยใช้เครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-VIS
- สำหรับการทดสอบเคซีน ให้วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 280 นาโนเมตร เพื่อตรวจจับปริมาณไทโรซีนหรือกรดอะมิโนอะโรมาติกอื่นๆ ที่ปล่อยออกมาจากการย่อยเคซีน
- บันทึกค่าการดูดกลืนแสงสำหรับแต่ละตัวอย่าง
หมายเหตุ
- ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวทำละลายที่ใช้สำหรับสารสกัดจากพืชไม่รบกวนการทำงานของเอนไซม์หรือการวัด UV-VIS
- รักษาตัวอย่างทั้งหมดไว้ที่อุณหภูมิ 37°C ในระหว่างการฟักเพื่อให้เอนไซม์มีกิจกรรมเหมาะสมที่สุด
- ทำซ้ำตัวอย่างแต่ละชุดสามครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าจะได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้
ผลลัพธ์และการตีความ
- การลดลงของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร (สำหรับ BAPNA) หรือ 280 นาโนเมตร (สำหรับเคซีน) เมื่อมีสารสกัดจากพืช บ่งชี้ถึงการยับยั้งทริปซิน
- ความสามารถของสารสกัดจากพืชในการยับยั้งทริปซินสามารถวัดได้โดยการเปรียบเทียบกับตัวควบคุมเชิงบวก
| Mechanism | - |
| Appearance | - |
| Longevity | - |
| Strength | - |
| Storage | - |
| Shelf Life | - |
| Allergen(s) | - |
| Dosage (Range) | - |
| Recommended Dosage | - |
| Dosage (Per Day) | - |
| Recommended Dosage (Per Day) | - |
| Mix Method | - |
| Heat Resistance | - |
| Stable in pH range | - |
| Solubility | - |
| Product Types | - |
| INCI | - |
Service Steps
| Step | Procedure | Expected Result |
|---|---|---|
| 1 | Prepare the... |
A 1 mg/mL plant extract solution ready for testing. |
| 2 | Prepare... |
A clear Tris-HCl buffer at 20 mM and pH 7.5. |
| 3 | Dissolve... |
A trypsin solution at the required concentration (60 µg in the chosen volume) in Tris-HCl buffer. |
| 4 | Prepare... |
A 1 mM BApNA substrate solution in Tris-HCl buffer with 1% DMSO. |
| 5 | Prepare... |
A 1 mg/mL AEBSF solution as a known inhibitor of trypsin.And negative control. |
| 6 | Pipette 40... |
Each well contains 40 µL of trypsin. |
| 7 | Pipette 40... |
Each well now contains 80 µL total volume: 40 µL trypsin + 40 µL sample/control. |
| 8 | Incubate the... |
Pre-incubation for trypsin inhibition reaction to occur. |
| 9 | Add 100... |
Substrate is introduced, final well volume is 180 µL. |
| 10 | Incubate the... |
Enzymatic hydrolysis of BApNA occurs (or is inhibited), generating color. |
| 11 | Add 30%... |
Reaction is halted by acidification; color development is stabilized. |
| 12 | Measure and... |
Absorbance values (OD) for control and sample wells are obtained. |
| 13 | Calculate percentage... |
Percentage inhibition result for each sample. |
ตะกร้า
ไม่มีสินค้า
Subtotal:
฿0.00
฿0.00
รวมทั้งสิ้น :