คอเลสเตอรอลมีบทบาทสำคัญในร่างกายมนุษย์ โดยใช้เป็นส่วนประกอบหลักของเยื่อหุ้มเซลล์ ช่วยให้เซลล์มีความยืดหยุ่นและคงรูปร่างได้ นอกจากนี้ยังเป็นสารตั้งต้นในการสังเคราะห์ฮอร์โมนหลายชนิด เช่น ฮอร์โมนเพศ (เอสโตรเจนและเทสโทสเตอโรน) และฮอร์โมนคอร์ติซอลที่เกี่ยวข้องกับการตอบสนองต่อความเครียด คอเลสเตอรอลยังใช้ในการสร้างวิตามินดี ซึ่งช่วยในการดูดซึมแคลเซียมและเสริมสร้างกระดูกให้แข็งแรง ในระบบทางเดินอาหาร คอเลสเตอรอลช่วยในการผลิตน้ำดี ซึ่งจำเป็นสำหรับการย่อยไขมันและดูดซึมสารอาหารที่ละลายในไขมัน เช่น วิตามินเอ ดี อี และเค