ไนโตรเซฟินใช้เป็นสารทดสอบในการตรวจสอบการผลิตเบต้า-แลคตาเมสในแบคทีเรีย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการทดสอบความไวต่อยาปฏิชีวนะ แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์เบต้า-แลคตาเมสจะสามารถย่อยสลายไนโตรเซฟินได้ ทำให้เกิดการเปลี่ยนสีจากสีเหลืองเป็นสีแดง ซึ่งเป็นตัวบ่งชี้ที่ชัดเจนของการดื้อยาปฏิชีวนะ นอกจากนี้ยังใช้ในห้องปฏิบัติการทางการแพทย์และวิจัยเพื่อศึกษากลไกการดื้อยาของแบคทีเรีย และพัฒนาวิธีการรักษาใหม่ๆ ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น