ใช้ในห้องปฏิบัติการเป็นสารตั้งต้นในการศึกษาการทำงานของเอนไซม์ โดยเฉพาะเอนไซม์ที่ทำหน้าที่ย่อยสลายเอสเทอร์ เช่น เอสเทอเรสและไลเพส ซึ่งเมื่อเอนไซม์ทำปฏิกิริยากับสารนี้จะเกิดผลิตภัณฑ์ที่มีสีเหลืองคือ 4-ไนโตรฟีนอล ที่สามารถวัดความเข้มข้นได้ด้วยการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่น 400-410 นาโนเมตร ทำให้สามารถติดตามอัตราการเกิดปฏิกิริยาได้อย่างแม่นยำและสะดวก

นอกจากนี้ยังใช้เป็นสารตัวติดตามในงานวิจัยด้านชีวเคมีเพื่อประเมินฤทธิ์ของสารยับยั้งเอนไซม์ หรือศึกษาภาวะที่มีผลต่อการทำงานของเอนไซม์ เช่น pH อุณหภูมิ และตัวทำละลาย

ในบางกรณี ยังนำมาใช้ในการสังเคราะห์สารประกอบอินทรีย์อื่นที่ต้องการหมู่ไนโตรฟีนิลเป็นตัวบ่งชี้หรือโครงสร้างหลัก