4-Methylumbelliferyl phosphate ใช้กันอย่างแพร่หลายเป็นสารตั้งต้นในเทคนิคการทดสอบทางเอนไซม์ โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับตรวจจับกิจกรรมของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส เมื่อเอนไซม์ทำปฏิกิริยากับสารประกอบนี้ จะปลดปล่อย 4-methylumbelliferone ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์ที่เรืองแสงสูง ช่วยให้สามารถวัดได้อย่างละเอียดอ่อนและเชิงปริมาณ การประยุกต์ใช้นี้มีความสำคัญในงานวิจัยชีวการแพทย์ การวินิจฉัยทางคลินิก และชีวเคมี สำหรับการศึกษา kinetics ของเอนไซม์ การตรวจสอบปฏิกิริยาเอนไซม์ และการตรวจจับ biomarkers ในตัวอย่างทางชีวภาพ นอกจากนี้ ยังใช้ใน histochemistry และ immunohistochemistry เพื่อแสดงภาพและระบุตำแหน่งกิจกรรมของเอนไซม์ในเนื้อเยื่อ ความไวสูงทำให้เป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าต่อการคัดกรองแบบ high-throughput และการทดสอบวินิจฉัย