Cholesterol esterase จาก Pseudomonas fluorescens ใช้อย่างแพร่หลายในงานวินิจฉัยทางคลินิกสำหรับการกำหนดปริมาณคอเลสเตอรอลในซีรัมโดยวิธีเอนไซม์ โดยย่อยสลาย cholesterol esters โดยเฉพาะเจาะจงเป็นคอเลสเตอรอลอิสระและกรดไขมันอิสระ ทำให้สามารถวัดระดับคอเลสเตอรอลรวมได้อย่างแม่นยำเมื่อใช้ร่วมกับเอนไซม์อื่น ๆ เช่น cholesterol oxidase ปฏิกิริยานี้มีความสำคัญในเครื่องวิเคราะห์ทางคลินิกอัตโนมัติและชุดทดสอบวินิจฉัย

เอนไซม์นี้ได้รับความนิยมในงานวินิจฉัยเนื่องจากมีความจำเพาะสูง ความเสถียร และกิจกรรมสูงภายใต้สภาวะการทดสอบ มีบทบาทสำคัญในการประเมินโปรไฟล์ลิพิด ช่วยประเมินความเสี่ยงของโรคหัวใจและหลอดเลือด นอกจากนี้ยังใช้ในงานวิจัยเพื่อศึกษาการเมตาบอลิซึมของลิพิดและจลนศาสตร์เอนไซม์ ต้นกำเนิดจากแบคทีเรียช่วยให้การผลิตสม่ำเสมอและขยายขนาดได้ในงานอุตสาหกรรม