ใช้เป็นสารตั้งต้นแบบโครโมเจนิกในการทดสอบกิจกรรมเอนไซม์เบตา-กาแลคโตซิเดส ซึ่งเป็นเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยสลายน้ำตาลแลคโตส โดยการไฮโดรไลซ์จะปล่อยพี-ไนโตรฟีนอล ซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์สีเหลืองที่สามารถวัดได้ด้วยสเปกโตรโฟโตเมตรี ในทางชีวเคมี จุลชีววิทยา และชุดตรวจวินิจฉัยสำหรับตรวจหาการมีอยู่หรือกิจกรรมของเอนไซม์ในตัวอย่างชีวภาพ สารนี้ช่วยในการระบุสายพันธุ์แบคทีเรียที่ผลิตเอนไซม์เบตา-กาแลคโตซิเดส เช่น ในทดสอบ ONPG นอกจากนี้ยังสนับสนุนการพัฒนายาในโรคที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์ และงานวิจัยด้านพันธุวิศวกรรมเพื่อศึกษาการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการผลิตเอนไซม์ดังกล่าว