เพื่อทดสอบฤทธิ์และประสิทธิภาพการต่อต้านจุลินทรีย์

เกณฑ์วิธีมาตรฐานสำหรับการทดสอบต้านจุลชีพกับ Candida albicans:

วัสดุที่ต้องการ:
- สายพันธุ์ Candida albicans (เช่น ATCC 90028)
- น้ำซุป Sabouraud dextrose หรือน้ำซุป RPMI-1640 พร้อมบัฟเฟอร์ MOPS
- วุ้น Sabouraud dextrose หรือวุ้น Mueller-Hinton เสริมด้วยกลูโคส 2% และเมทิลีนบลู 0.5 μg/mL
- สารต้านจุลชีพที่จะทดสอบ
- จานเพาะเชื้อปลอดเชื้อ
- ไม้พันสำลีหรือสเปรดเดอร์ที่ปราศจากเชื้อ
- ตู้ฟัก
- ห่วงจุลินทรีย์หรือเข็มปลูกเชื้อ

ขั้นตอน:

1. การเตรียมวัฒนธรรมแคนดิดา:
ก. เพาะเชื้อ Candida albicans ลงในน้ำซุป Sabouraud dextrose หรือน้ำซุป RPMI-1640 ด้วยบัฟเฟอร์ MOPS
ข. ฟักวัฒนธรรมน้ำซุปที่อุณหภูมิ 35-37°C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมงเพื่อให้ได้วัฒนธรรมน้ำซุปที่สดใหม่และกำลังเติบโต

2. การกำหนดมาตรฐานหัวเชื้อ:
ก. ปรับความขุ่นของการเพาะน้ำซุปให้ตรงกับมาตรฐานความขุ่นของ McFarland 0.5 (ประมาณ 1-5 x 10^6 CFU/มล.)
ข. ซึ่งสามารถทำได้โดยการเจือจางวัฒนธรรมน้ำซุปด้วยน้ำเกลือหรือน้ำซุปที่ปราศจากเชื้อ

3. การเตรียมแผ่นวุ้น:
ก. เตรียมวุ้น Sabouraud dextrose หรือ Mueller-Hinton agar ที่เสริมด้วยกลูโคส 2% และเมทิลีนบลู 0.5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ตามคำแนะนำของผู้ผลิต
ข. ปล่อยให้วุ้นแข็งตัวและแห้งก่อนใช้งาน

4. การเพาะเชื้อเพลตวุ้น:
ก. จุ่มสำลีหรือสเปรดเดอร์ฆ่าเชื้อลงในหัวเชื้อมาตรฐานแล้วเกลี่ยให้ทั่วบนจานวุ้นเพื่อให้ได้สนามหญ้าที่มีการเจริญเติบโตของเชื้อราสม่ำเสมอ
ข. ปล่อยให้หัวเชื้อแห้งสักครู่ก่อนดำเนินการต่อ

5. การใช้สารต้านจุลชีพ:
ก. ขึ้นอยู่กับชนิดของสารต้านจุลชีพ (เช่น จาน หลุม หรือแถบ) ปฏิบัติตามวิธีการที่เหมาะสมในการทาสารดังกล่าวกับเพลตวุ้นที่เพาะเชื้อ
ข. สำหรับวิธีการแพร่กระจายแบบจาน ให้วางแผ่นต้านจุลชีพลงบนพื้นผิววุ้นที่ได้รับการฉีดเชื้อโดยใช้คีมปลอดเชื้อ
ค. สำหรับวิธีการแพร่บ่อ ให้ตัดบ่อลงในวุ้นโดยใช้เครื่องเจาะไม้ก๊อกปลอดเชื้อหรือเครื่องมือที่คล้ายกัน แล้วปิเปตสารละลายต้านจุลชีพลงในบ่อ
ง. สำหรับแถบต้านจุลชีพ ให้วางแถบไว้บนพื้นผิววุ้นที่ได้รับการฉีดวัคซีนตามคำแนะนำของผู้ผลิต

6. การฟักตัว:
ก. ฟักเพลตวุ้นที่เพาะไว้ที่อุณหภูมิ 35-37°C เป็นเวลา 20-24 ชั่วโมง

7. การตีความ:
ก. หลังจากการฟักตัว ให้ตรวจสอบแผ่นเพื่อดูโซนการยับยั้งรอบๆ สารต้านจุลชีพ
ข. วัดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนการยับยั้งเป็นมิลลิเมตร (มม.) โดยใช้คาลิปเปอร์หรือไม้บรรทัด
ค. อ้างถึงแนวทางมาตรฐานหรือเกณฑ์การตีความ (เช่น CLSI หรือ EUCAST) เพื่อพิจารณาความอ่อนไหวหรือการดื้อยาของ Candida albicans ต่อสารต้านจุลชีพที่ทดสอบแล้ว