เจนตามัยซิน ซัลเฟตใช้เป็นยาปฏิชีวนะที่มีประสิทธิภาพในการรักษาการติดเชื้อแบคทีเรียชนิดรุนแรง มักใช้ในการรักษาโรคติดเชื้อในระบบทางเดินปัสสาวะ การติดเชื้อในกระแสเลือด และการติดเชื้อที่ผิวหนัง นอกจากนี้ยังใช้ในทางการแพทย์เพื่อป้องกันการติดเชื้อหลังการผ่าตัด และในบางกรณีใช้เพื่อรักษาการติดเชื้อในดวงตาและหู โดยทั่วไปจะใช้ในรูปแบบยาฉีดหรือยาหยอด ควรใช้ภายใต้การดูแลของแพทย์เพื่อหลีกเลี่ยงผลข้างเคียงและภาวะดื้อยา