4-Nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydrate ใช้อย่างแพร่หลายเป็นสารตั้งต้นในงานทดสอบเอนไซม์ โดยเฉพาะกิจกรรมของอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส ทำหน้าที่เป็นสารโครโมเจนิก ซึ่งเอนไซม์จะเร่งการไฮโดรไลซิสของสารประกอบนี้ สร้างผลิตภัณฑ์สีเหลือง 4-nitrophenol ที่สามารถวัดปริมาณได้ด้วยสเปกโตรโฟโตเมทรีที่ความยาวคลื่น 405 nm การประยุกต์ใช้นี้มีความสำคัญในงานวิจัยทางชีวเคมี การวินิจฉัยทางคลินิก และการศึกษาทางเภสัชศาสตร์ เพื่อวัดกิจกรรมเอนไซม์และคัดกรองตัวยับยั้ง นอกจากนี้ ยังใช้ในอิมมูโนแอสเซย์และการย้อมสีฮิสโตเคมีคอลเพื่อตรวจจับชีวมอลลิคิวลเฉพาะหรือส่วนประกอบเซลล์ ความเสถียรและความไวทำให้เป็นเครื่องมือที่เชื่อถือได้ในห้องปฏิบัติการต่างๆ