H-Val-pNA ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นในงานวิจัยทางชีวเคมีและเภสัชวิทยา เพื่อศึกษากิจกรรมของเอนไซม์โปรตีเอส โดยเฉพาะอย่างยิ่งในการวัดกิจกรรมของเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยโปรตีน เมื่อเอนไซม์ทำปฏิกิริยากับ H-Val-pNA จะเกิดการปล่อย p-nitroaniline (pNA) ซึ่งสามารถวัดได้ด้วยเครื่องสเปกโตรโฟโตเมทรีที่ความยาวคลื่นประมาณ 405 nm ทำให้สามารถประเมินกิจกรรมของเอนไซม์ได้อย่างแม่นยำ นอกจากนี้ยังใช้ในการพัฒนายาและสารยับยั้งเอนไซม์เพื่อการรักษาโรคที่เกี่ยวข้องกับการทำงานผิดปกติของเอนไซม์โปรตีเอส