เอสคูลินเซสควิไฮเดรตใช้เป็นสารจำเพาะในสื่อจุลชีววิทยาเพื่อตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ β-กลูโคซิเดส โดยการย่อยสลายเอสคูลินจะผลิตเอสคูเลติน ซึ่งทำปฏิกิริยากับไอออนเหล็กให้เกิดตะกอนสีดำ ช่วยในการระบุเชื้อโรคเฉพาะ เช่น Listeria monocytogenes และเอ็นเทอโรค็อกไก ใช้บ่อยในสื่อเพาะเลี้ยงแบบเลือกเพศ-จำเพาะ เช่น bile esculin agar เพื่อแยกและจำแนกแบคทีเรียแกรมบวก ในขณะที่ยับยั้ง flora ที่ไม่ต้องการบางส่วนผ่านส่วนประกอบของสื่อ นอกจากนี้ ยังใช้ในบางการทดสอบยับยั้งการแข็งตัวของเลือดเพื่อศึกษากลไกการจับตัวของเลือด เนื่องจากอนุพันธ์ของมันยับยั้งปัจจัยการแข็งตัว เอสคูลินยังทำหน้าที่เป็นสารเรืองแสงในวิธีการตรวจจับทางชีวเคมีภายใต้แสง UV