เพร็กเนนโหลนอะซีเตทถูกใช้อย่างแพร่หลายในอุตสาหกรรมเภสัชกรรมเป็นสารตั้งต้นในการสังเคราะห์ฮอร์โมนสเตียรอยด์ต่างๆ มีบทบาทสำคัญในการผลิตคอร์ติโคสเตียรอยด์ ซึ่งจำเป็นสำหรับการรักษาโรคอักเสบ โรคภูมิต้านตนเอง และโรคภูมิแพ้ นอกจากนี้ ยังทำหน้าที่เป็นสารกลางในการสังเคราะห์ฮอร์โมนเพศ เช่น โปรเจสเตอโรน เทสโทสเตอโรน และเอสโตรเจน ซึ่งสำคัญสำหรับสุขภาพการสืบพันธุ์และการบำบัดทดแทนฮอร์โมน ในการวิจัย ถูกนำมาใช้ในการศึกษาการเกิดสเตียรอยด์และเส้นทางชีวเคมีที่เกี่ยวข้องกับการผลิตฮอร์โมน การประยุกต์ใช้ยังขยายไปสู่การพัฒนายา治療ที่มุ่งเป้าไปที่ความไม่สมดุลของฮอร์โมนและความผิดปกติทางเมแทบอลิซึม