16-Dehydropregnenolone ถูกใช้เป็นหลักเป็นสารกลางในการสังเคราะห์ฮอร์โมนสเตียรอยด์ต่างๆ โดยมีบทบาทสำคัญในการผลิตคอร์ติโคสเตียรอยด์ ซึ่งจำเป็นสำหรับการรักษาอาการอักเสบ โรคภูมิต้านตนเอง และโรคภูมิแพ้ นอกจากนี้ ยังถูกนำมาใช้ในการพัฒนาฮอร์โมนเพศ รวมถึงเทสโทสเตอโรนและเอสโตรเจน ซึ่งมีความสำคัญสำหรับการจัดการความไม่สมดุลของฮอร์โมนและสุขภาพการสืบพันธุ์ การประยุกต์ใช้ขยายไปยังอุตสาหกรรมเภสัชกรรม โดยทำหน้าที่เป็นวัตถุดิบหลักในการสร้างยารักษาที่มุ่งเป้าไปยังความผิดปกติของต่อมไร้ท่อ นักวิจัยยังนำมาใช้ในการศึกษาที่มุ่งเน้นการทำความเข้าใจการเผาผลาญสเตียรอยด์และการพัฒนายาใหม่ๆ