ใช้ในกระบวนการวิจัยด้านชีวเคมี โดยเฉพาะในการศึกษาเส้นทางการสังเคราะห์กรดโฟลิกและเอนไซม์ที่เกี่ยวข้อง เช่น ไดไฮโดรโฟเลตเรดักเทส (DHFR) ซึ่งมีความสำคัญต่อการพัฒนายาต้านจุลชีพ ยาต้านมะเร็ง และยารักษาโรคเรื้อรังบางชนิด สารนี้ยังสามารถใช้เป็นตัวตั้งต้นในการสังเคราะห์อนุพันธ์ของเพเทอริดีนที่มีฤทธิ์ทางชีวภาพ รวมถึงประยุกต์ใช้ในระบบตรวจวัดทางชีวภาพที่ต้องการความเฉพาะเจาะจงสูง