การวิเคราะห์ HPLC ของความบริสุทธิ์ของเอคโตอิน

โปรโตคอลสำหรับการวิเคราะห์ความบริสุทธิ์ของ HPLC ของ Ectoin:

วัสดุที่ต้องการ:

ระบบ HPLC พร้อมเครื่องตรวจจับ UV/Vis
ตัวทำละลายเกรด HPLC (เช่น น้ำ อะซิโตไนไตรล์)
คอลัมน์การวิเคราะห์ที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์เอคโตอิน (เช่น คอลัมน์ C18)
มาตรฐาน Ectoin สำหรับการสอบเทียบ
ตัวอย่าง Ectoin ที่จะวิเคราะห์
ระบบการกรอง (ขนาดรูพรุน 0.2 μm)
ไมโครปิเปตและหลอดฉีดยา
บัฟเฟอร์เฟสเคลื่อนที่ (ถ้าจำเป็น)

ขั้นตอน:

การเตรียมเฟสเคลื่อนที่:

ขึ้นอยู่กับลักษณะของ Ectoin และความสามารถในการละลาย ให้เตรียมระยะเคลื่อนที่ที่เหมาะสม เฟสเคลื่อนที่โดยทั่วไปอาจประกอบด้วยส่วนผสมของน้ำและอะซิโตไนไตรล์ในสัดส่วนที่แตกต่างกัน ปรับตามเวลากักเก็บและประสิทธิภาพการแยกสารของสารประกอบ

การปรับสมดุลคอลัมน์:

ปรับสมดุลคอลัมน์ HPLC กับเฟสเคลื่อนที่ภายใต้สภาวะที่แนะนำ (อุณหภูมิ อัตราการไหล ฯลฯ) ขั้นตอนนี้ช่วยให้แน่ใจว่าคอลัมน์พร้อมสำหรับการฉีดตัวอย่างและให้ผลลัพธ์ที่สม่ำเสมอ

การเตรียมสารละลายมาตรฐาน:

เตรียมสารละลายมาตรฐานของ Ectoin โดยการละลาย Ectoin มาตรฐานในปริมาณที่ทราบในตัวทำละลายที่เหมาะสม ความเข้มข้นควรอยู่ภายในช่วงเชิงเส้นของเครื่องตรวจจับ

การจัดเตรียมตัวอย่าง:

หากตัวอย่างอยู่ในรูปของแข็ง ให้ละลายในตัวทำละลายที่เหมาะสม ตรวจสอบให้แน่ใจว่าตัวอย่างละลายหมดและปราศจากอนุภาค กรองสารละลายผ่านตัวกรองเมมเบรนขนาด 0.2 μm เพื่อขจัดสิ่งเจือปนที่ไม่ละลายน้ำ

การสอบเทียบ:

ฉีดชุดสารละลายมาตรฐานที่มีความเข้มข้นต่างกันไปบนระบบ HPLC เพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบ ใช้การตอบสนองของเครื่องตรวจจับ (เช่น พื้นที่จุดสูงสุด) เพื่อหาปริมาณความเข้มข้นของเอ็กโทอินในสารละลายมาตรฐานแต่ละชนิด

การฉีดตัวอย่าง:

ฉีดสารละลายตัวอย่างที่เตรียมไว้เข้าสู่ระบบ HPLC โดยใช้ปริมาตรการฉีดที่เหมาะสม ตรวจสอบให้แน่ใจว่าปริมาตรการฉีดอยู่ภายในช่วงเชิงเส้นของเครื่องตรวจจับ

การแยกโครมาโตกราฟี:

ใช้งานระบบ HPLC ภายใต้สภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการแยกโครมาโทกราฟีของ Ectoin และสิ่งเจือปนใดๆ ที่มีอยู่ในตัวอย่าง ติดตามการตอบสนองของเครื่องตรวจจับ (เช่น การดูดกลืนแสง UV) เพื่อตรวจจับและหาปริมาณพีคของ Ectoin

การวิเคราะห์ข้อมูล:

คำนวณความบริสุทธิ์ของตัวอย่างตามพื้นที่พีคหรือความสูงพีคของเอ็กโทอินโดยสัมพันธ์กับพื้นที่ทั้งหมดหรือความสูงของพีคทั้งหมดในโครมาโตกราฟี เปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาและรูปร่างสูงสุดของตัวอย่างกับของมาตรฐานเพื่อยืนยันเอกลักษณ์ของ Ectoin