4′,5′-ดิบรอมโมฟลูออเรสเซอินถูกนำมาใช้อย่างกว้างขวางในด้านวิทยาศาสตร์และอุตสาหกรรม เนื่องจากคุณสมบัติการเรืองแสงที่โดดเด่น โดยมักใช้เป็นสารติดตามในกระบวนการวิเคราะห์ทางเคมีและชีวภาพ เช่น การศึกษาเซลล์และการติดตามปฏิกิริยาเคมี นอกจากนี้ยังถูกใช้ในอุตสาหกรรมสิ่งทอและกระดาษเพื่อเพิ่มความสว่างและสีสันให้กับผลิตภัณฑ์ ในทางการแพทย์ สารนี้มีบทบาทสำคัญในการพัฒนาเทคนิคการวินิจฉัยโรคและการวิจัยทางเภสัชวิทยา เนื่องจากสามารถตรวจจับและติดตามโมเลกุลเป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพ