แคลเซียม เลโวโฟลิเนต ใช้อย่างแพร่หลายในการรักษาทางการแพทย์ โดยเฉพาะในด้านมะเร็งวิทยา มันทำหน้าที่เป็นยาแก้พิษเพื่อต่อต้านผลกระทบพิษของเมโทเทรกเซต ซึ่งเป็นยาเคมีบำบัด โดยช่วยกู้คืนเซลล์ปกติจากความเสียหาย สารประกอบนี้ยังใช้ร่วมกับฟลูออโรยูราซิล (5-FU) เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการรักษามะเร็งลำไส้ใหญ่ โดยทำหน้าที่เป็นอนุโลมของโฟเลต ช่วยในการสังเคราะห์และซ่อมแซม DNA ทำให้เป็นส่วนประกอบสำคัญในแผนการรักษามะเร็ง นอกจากนี้ ยังใช้ในการจัดการภาวะขาดโฟเลตและในบางกรณีของโรคข้ออักเสบรูมาตอยด์เพื่อสนับสนุนการทำงานของเซลล์และลดการอักเสบ